Meilunbio活死細(xì)菌染色試劑盒(可應(yīng)用流式分析)
LIVE/DEADBacterial Viability and Counting Kit
for flow cytometry
產(chǎn)品貨號:MA0390 100T [¥4500.00]
http://m.thebestconsultoria.com/goods.php?id=22922
美侖活死細(xì)菌染色試劑盒(LIVE/DEAD Bacterial Viability and Counting Kit, for flow cytometry)可以通過流式細(xì)胞儀有效的區(qū)分活、死細(xì)菌并實現(xiàn)定量檢測;而且對各類細(xì)菌的混合物也可以實現(xiàn)定量分析檢測。該試劑盒采用兩種核酸染料來進(jìn)行細(xì)菌活力測定:綠色熒光染料meilungreen(美侖自主研發(fā),功能等同于SYTO 9)以及紅色熒光染料PI(碘化丙啶),并通過標(biāo)準(zhǔn)微球精準(zhǔn)測量樣品體積。用適當(dāng)比例的meilungreen與PI混合物染色時,細(xì)胞膜完好的細(xì)菌發(fā)出明亮的綠色熒光,而細(xì)胞膜受損的細(xì)菌則表現(xiàn)出綠色熒光明顯減弱,同時發(fā)出較強(qiáng)的紅色熒光。細(xì)胞類型和革蘭氏特征會影響死細(xì)菌產(chǎn)生紅色熒光的強(qiáng)度。meilungreen與PI染料在大部分流式細(xì)胞儀中都是由488nm激光器實現(xiàn)有效激發(fā)的,各自的核酸復(fù)合物熒光信號可分別在綠色通道和紅色通道中檢測到,并且?guī)缀鯖]有背景熒光。
標(biāo)準(zhǔn)微球懸浮液作為樣品體積的參考標(biāo)準(zhǔn),尺寸和熒光經(jīng)過仔細(xì)篩選,以確保微球在流式細(xì)胞檢測中熒光--側(cè)向散射圖中可以明顯的區(qū)別于被染色的細(xì)菌。用meilungreen和PI對細(xì)菌培養(yǎng)液進(jìn)行簡單染色,在流式細(xì)胞儀上分析樣本前加入固定數(shù)量的微球?;罹退谰约拔⑶蛟跓晒?-側(cè)向散射圖中很容易區(qū)分,然后通過細(xì)胞圖中細(xì)菌事件數(shù)與微球事件數(shù)的比值來計算死菌和活菌的濃度(見下方圖1)。
細(xì)菌活力標(biāo)準(zhǔn):
細(xì)菌的生存能力不能用簡單的生理或者形態(tài)參數(shù)來定義,因此單一的生存能力測定可能會在實驗中引入一定的偏差。某些條件下,細(xì)菌受損的細(xì)胞膜可能會修復(fù),即使是這種細(xì)菌在實驗中也可能被標(biāo)記為“死”細(xì)菌。相反,一些細(xì)胞膜完整的細(xì)菌可能無法在營養(yǎng)培養(yǎng)基中繁殖,但卻被認(rèn)定為“活”細(xì)菌。結(jié)合幾種不同的生存能力測定方法,如膜滲透性、酶活性和氧化還原電位,可以更全面地評估細(xì)菌的生存能力,并消除任何單一生存能力測定方法的固有限制。
對比實驗
以事實為依據(jù),與進(jìn)口對比毫不遜色
1. 革蘭氏陰性菌(大腸桿菌為例)活死細(xì)菌染色流式檢測結(jié)果對比
圖1:大腸桿菌活死細(xì)菌染色流式檢測結(jié)果。大腸桿菌的活菌(未處理)、死菌(70%乙醇處理)懸液按一定比例混合,分別采用本試劑盒和進(jìn)口品牌試劑盒進(jìn)行流式檢測。通過綠色熒光或者紅色熒光對側(cè)向散射結(jié)果圖,分別圈出細(xì)菌群與標(biāo)準(zhǔn)微球群,然后通過綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖展示細(xì)菌群的分布?;睢⑺谰臐舛扔嬎憧梢酝ㄟ^綠色或者紅色熒光對側(cè)向散射流式結(jié)果圖、或者綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖,根據(jù)實際情況選擇活死菌分群最明顯的結(jié)果圖來進(jìn)行計算?;睢⑺谰旱姆植嘉恢脮蚣?xì)菌種類和參數(shù)設(shè)置而存在差別,一些點會分布于劃定區(qū)域以外,也應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑u估。結(jié)果顯示美侖活死細(xì)菌染色試劑盒檢測效果媲美進(jìn)口品牌。
2. 革蘭氏陽性菌(乳酸桿菌為例)活死細(xì)菌染色流式檢測結(jié)果對比
圖2:乳酸桿菌活死細(xì)菌染色流式檢測結(jié)果。乳酸桿菌的活菌(未處理)、死菌(電穿孔處理)懸液按一定比例混合,分別采用本試劑盒和進(jìn)口品牌試劑盒進(jìn)行流式檢測。通過綠色熒光或者紅色熒光對側(cè)向散射結(jié)果圖,分別圈出細(xì)菌群與標(biāo)準(zhǔn)微球群,然后通過綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖展示細(xì)菌群的分布。活、死菌的濃度計算可以通過綠色或者紅色熒光對側(cè)向散射流式結(jié)果圖、或者綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖,根據(jù)實際情況選擇活死菌分群最明顯的結(jié)果圖來進(jìn)行計算?;?、死菌群的分布位置會因細(xì)菌種類和參數(shù)設(shè)置而存在差別,一些點會分布于劃定區(qū)域以外,也應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑u估。結(jié)果顯示美侖活死細(xì)菌染色試劑盒檢測效果媲美進(jìn)口品牌。圖3. 使用美侖CCK-8對細(xì)胞狀態(tài)的影響。
操作簡易流程&適用菌種范圍
1. 準(zhǔn)備菌懸液
2. 細(xì)菌染色
3. 制備單染管進(jìn)行設(shè)備調(diào)節(jié)
4. 流式細(xì)胞儀檢測染色后的細(xì)菌
5. 計算:菌濃度=(菌群分布區(qū)事件數(shù)×稀釋倍數(shù))/(微球分布區(qū)事件數(shù)×5×10-6)/ ml
本試劑盒適用菌種廣泛,主要包括:蠟樣芽胞桿菌、枯草桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、黃體微球菌、草分枝桿菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、沙雷菌、宋內(nèi)志賀菌、金黃色葡萄球菌和釀膿鏈球菌等。以上菌種通過該試劑盒檢測的計數(shù)結(jié)果均能夠與標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)結(jié)果表現(xiàn)出良好的相關(guān)性。
其他信息請參考說明書。
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